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產品簡介
聚丙烯酰胺純度 聚丙烯酰胺 價格 聚丙烯酰胺 報價
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產品價格：￥13000
上架日期：2012-07-14 16:06:09
產地：河南
發(fā)貨地：鄭州
供應數量：不限
最少起訂：1噸
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詳細說明
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    一）原  理
    由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制，因此可以形成“連續(xù)系統”和“不連續(xù)系統”兩種電泳系統?！安贿B續(xù)系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是：（1）使用兩種不同濃度的凝膠系統；（2）配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同，并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也不相同。在實驗中，電泳凝膠分為兩層：上層膠為低濃度的大孔膠，稱為濃縮膠或成層膠，配制此層膠的緩沖液是Tris-HCl，pH6.7；下層膠則是高濃度的小孔膠，稱為分離膠或電泳膠，成膠的緩沖液是Tris-HCl，pH8.9。電泳槽中的電極緩沖液則是Tris-甘氨酸，pH8.3?？梢?，凝膠濃度、成膠成分、pH與電泳液緩沖系統各不相同，形成了一個不連續(xù)系統。

    電泳時，蛋白質樣品放置在濃縮膠上，為防止蛋白質樣品在電極緩沖液中擴散，因而加入等體積的40%蔗糖或50%甘油與之混合，以提高密度；為觀察蛋白質樣品泳動的情況，樣品中還加入溴酚藍等示蹤染料，這些有色物質的分子比任何一種大分子物質泳動的速度都快，只要染料未泳動出凝膠管，樣品就沒有走出膠管的危險。

    在不連續(xù)系統中，當接通電源開始電泳時，系統中的甘氨酸、蛋白質、HCl中的氯離子和溴酚藍等均解離為陰離子，形成離子流向陽極泳動。其遷移率取決于離子的電荷數、分子量大小及形狀。然而，當電極緩沖液（pH8.3）中的甘氨酸離子在進入濃縮膠時，它們遇到了比pH8.3低的 pH(6.7)，pH下降了近兩個單位，幾乎接近于甘氨酸的等電點（5.97），于是甘氨酸的解離度突然降低，所帶電荷量明顯減少，遷移率減慢。血清樣品中個蛋白質成分也進入濃縮膠，pH的改變雖對其解離度有影響，但比對甘氨酸要小得多，其遷移率比甘氨酸要大，而且濃縮膠的膠孔較大對蛋白質分子不會造成阻礙。濃縮膠中的Tris-HCl中的Cl-則全部解離，分子量很小，摩擦力不大，其遷移率比蛋白質、溴酚藍都快。于是在濃縮膠中各種離子的遷移率形成：甘氨酸<蛋白質<溴酚藍<Cl-的順序。

    甘氨酸分子進入濃縮膠后解離度的下降，造成移動離子流的突然缺失，出現電流減小電導率下降。然而，整個電泳系統中其他部分的電流仍維持不變，根據電導及電位梯度成反比（E=I/n，E為電位梯度，I為電流強度，n為電導率）的關系，于是在前導離子Cl-離子與慢離子甘氨酸離子之間突然形成了較高的局部電位梯度。處在這個局部高電位梯度區(qū)域中的血清蛋白質各成分，在高電場作用下迅速以不同的速度（分子量不同、帶電量不同）泳向前導Cl-離子區(qū)域。當到達前導Cl-區(qū)域時因不缺少離子，大的電場強度減弱，離子移動速度急速減慢下來，其結果在甘氨酸和Cl-離子之間的蛋白質樣品就按其分子的大小堆積或濃縮成層。通過這個過程，是蛋白質樣品濃縮了好幾百倍，且蛋白質各成分也按一定的順序排列成層。

    當離子流繼續(xù)向前，進入以pH8.9緩沖液配制的小孔膠時，蛋白質分子在小孔膠里遇到阻力，遷移率減慢，同時在pH8.9條件下，甘氨酸又充分解離，其帶電量增加，消除了離子流缺失的現象，小分子的甘氨酸離子趕上了蛋白質。凝膠各部分恢復具有恒定的電場強度，蛋白質的分離完全按一般區(qū)帶點用方式進行。
    由以上的原理可見，聚丙烯酰胺凝膠的不連續(xù)電泳最主要的優(yōu)點就是使蛋白質樣品經濃縮膠后，形成緊密地壓縮層進入分離膠。蛋白質各成分預先分開且壓縮成層，可以減少在電泳時，成分間由于自由擴散而造成的區(qū)帶相互重疊所帶來的干擾，這樣就提高了電泳的分辨能力。由于這個優(yōu)點，少量的蛋白質樣品（1-100µg）也能分離得很好，分辨率高使血清蛋白質可獲得近20多個區(qū)帶。

    （二）試劑和器材
    1．測試樣品  血清蛋白、脫鹽后的IgG、純化后的IgG。
    2．試劑
    （1）制備分離膠、濃縮膠有關試劑
    ① 凝膠緩沖液：稱取1mol/L HCl 48ml，Tris（三羥基氨基甲烷）36.6g，TEMED（N，N，N`，N`-四甲基乙二胺）0.23ml，加重蒸水至80ml使其溶解，調pH8.9，然后加重蒸餾水定容至100ml，置棕色瓶，4℃貯存。
    ② 分離膠貯液：28%Arc-0.735%Bis儲液：丙烯酰胺（Acr）28.0g，甲叉雙丙烯酰胺（Bis）0.735g，加重蒸水使其溶解后定容至 100ml。過濾后置棕色試劑瓶中，4℃ 貯存，一般可放置1個月左右。
    ③  分析純過硫酸胺（AP）（AR） 0.14g加重蒸水至 100ml，置棕色瓶，4℃儲存僅能用一周，最好當天配制。上述3種試劑用于制備分離膠。

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