一、產(chǎn)品概述
脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)又稱嘔吐毒素(vomitoxin)，主要是由鐮刀菌的某些種產(chǎn)生的化學結(jié)構(gòu)和生物活性相似的有毒代謝產(chǎn)物——單端孢霉烯族化合物中的一種。DON 的主要產(chǎn)生菌是禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum)，DON廣泛存在于全球，主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物，也污染糧食制品，人和動物在誤食被該毒素污染的糧谷類后可以產(chǎn)生廣泛的毒性效應(yīng)。近年來發(fā)現(xiàn)DON可能與人類食管癌、IgA腎病有關(guān)，對人類及動物的健康構(gòu)成威脅。DON屬于劇毒或中等毒物，人畜攝入了被DON污染的食物／飼料后，會導致厭食、嘔吐、腹瀉、發(fā)燒、站立不穩(wěn)、反應(yīng)遲鈍等急性中毒癥狀，嚴重時損害造血系統(tǒng)造成死亡。研究表明，DON可能對免疫系統(tǒng)有影響，有明顯胚胎毒性和一定致畸作用，可能有遺傳毒性，但無致癌、致突變作用。由于DON的危害嚴重，引起了各國的普遍重視。谷物及飼料中DON的含量有嚴格的限量標準。我國谷物中DON 的限量標準為1．0 mg／kg 。因此，有必要對其進行有效的監(jiān)控。HPLC或GC-MS用作檢測嘔吐毒素的方法，但是其前處理步驟繁瑣，費用昂貴。酶聯(lián)免疫檢測試劑盒則可經(jīng)濟、快速地檢測嘔吐毒素。
二、適用范圍
嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒可定性、定量測定大米、小米、面等谷物和飼料中的嘔吐毒素。
三、試驗原理
嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒采用競爭ELISA，在微孔板上預包被嘔吐毒素抗原，加入樣本/嘔吐毒素標準品溶液及辣根過氧化物酶標記的嘔吐毒素抗體。樣本或標準品溶液中的嘔吐毒素與預包被在板孔上的嘔吐毒素抗原競爭結(jié)合辣根過氧化物酶標記的嘔吐毒素抗體，與樣本或標準品溶液中的嘔吐毒素結(jié)合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物嘔吐毒素抗原的含量成負相關(guān)。對照標準曲線，即可得出相應(yīng)殘留物嘔吐毒素的含量。
四、注意事項
1. 室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
3. 每加一種試劑前需將其搖勻。
4. 反應(yīng)終止液為2M鹽酸，避免接觸皮膚。
5. 不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6. 儲存條件：
7. 保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
8. 試劑變質(zhì)的跡象：
9. 發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。
10. 在加入顯色液后，一般顯色時間為20～30min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到35min（或更長），但不得超過40min。反之，則減短反應(yīng)時間。
嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。
