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僅供科研使用，不得用于臨床檢驗(yàn)。

豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體（FMDV）檢測(cè)試劑盒（ELISA）

說(shuō)明書(shū)

貨號(hào)：INS0010004

    使用前，請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，如有不清楚的，請(qǐng)撥打24h技術(shù)支持專線：0714-6338558或18171667592/18108699172，咨詢清楚再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

黃石市艾恩斯生物科技有限公司

網(wǎng)址：www.inselisa.com

電話：0714-6338558

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測(cè)試劑盒（ELISA）

英文名稱：Test Kit for Antibodies to Porcine Foot and Mouth Disease Virus NSP（ELISA）

【包裝規(guī)格】

 48T/盒，96T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑用于檢測(cè)豬血清中口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體，可用于豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體疫苗免疫效果評(píng)價(jià)。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。在預(yù)包被豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體抗原（固相抗原，貨號(hào)：INS0010004C）的微孔酶標(biāo)板中，加入豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陰陽(yáng)性對(duì)照（貨號(hào)：INS0010004J）和待測(cè)樣本，溫育洗滌，再加入另一株HRP標(biāo)記的酶標(biāo)抗體（酶標(biāo)抗體，貨號(hào)：INS0010004E），經(jīng)過(guò)溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗體-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測(cè)樣品中豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體的濃度正相關(guān)，通過(guò)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體。

【主要組成成分】

主要成分

陰陽(yáng)性對(duì)照已經(jīng)通過(guò)測(cè)試，由于不存在一種試驗(yàn)方法能夠完全保證沒(méi)有這些物質(zhì)，本品必須按照具有潛在的感染性進(jìn)行處理，處理過(guò)程應(yīng)當(dāng)遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶標(biāo)儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

  無(wú)粉一次性乳膠手套

【儲(chǔ)存條件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個(gè)月。

  2、開(kāi)封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

  3、開(kāi)封后，按照建議的條件保存，樣品稀釋液、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體，有效期為28天，其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【適用儀器】

  半自動(dòng)的酶標(biāo)儀，如Thermo MK3，或者國(guó)產(chǎn)酶標(biāo)儀。

【樣本要求】

  樣本類型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過(guò)程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

     血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。

     用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。

     濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下，可以儲(chǔ)存72h，或者在- 20℃儲(chǔ)存6個(gè)月。樣本收集后，不是一次檢測(cè)完，請(qǐng)按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時(shí)在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗(yàn)方法】

試劑準(zhǔn)備

1、使用前，所有的組分都要至少?gòu)?fù)溫2h，確保充分復(fù)溫到室溫。

2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會(huì)有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。

3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后10分鐘內(nèi)使用。

操作程序

1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。

2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。

4、設(shè)置陰陽(yáng)性對(duì)照孔、樣本孔，陰陽(yáng)性對(duì)照孔各加對(duì)照品100μL，樣本孔加稀釋后樣本100μL。

5、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

6、揭開(kāi)封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)4次（共洗板5次）。若使用自動(dòng)洗板機(jī)，請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測(cè)的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。

7、所有孔加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL。

8、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

8、揭開(kāi)封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)4次（共洗板5次）。若使用自動(dòng)洗板機(jī)，請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測(cè)的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。

9、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育10min。

   10、每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值），無(wú)參比波長(zhǎng)用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

【參考值】

實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照≤0.12，陽(yáng)性對(duì)照≥0.58。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1.樣品A值≥0.37為陽(yáng)性；樣品A值在0.2到0.37之間為可疑；樣品A值＜0.2為陰性。

2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性或可疑時(shí)表明豬只抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。

【檢驗(yàn)方法的局限性】

1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。

2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用，過(guò)期產(chǎn)品不得使用。

3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。

4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。

5、如果樣本值高于最高標(biāo)準(zhǔn)品濃度值，請(qǐng)將樣本適當(dāng)稀釋后，再重新測(cè)定。

6、待測(cè)樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)前，請(qǐng)排除該因素。

7、通過(guò)其他方法得到的檢測(cè)結(jié)果，與本試劑盒測(cè)定結(jié)果不具有直接的可比性。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1、物理性能

試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無(wú)沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無(wú)破損漏氣。

2、陰性結(jié)果

陰性對(duì)照的OD值不高于0.12。

3、陽(yáng)性結(jié)果

陽(yáng)性對(duì)照的OD值不低于0.55。

4、特異性

本試劑盒識(shí)別天然和重組豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體，與結(jié)構(gòu)類似物無(wú)交叉。

5、穩(wěn)定性

2℃-8℃保存，有效期6個(gè)月。

包被板開(kāi)封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，使用期限為28天。

【注意事項(xiàng)】

生物安全

1、檢測(cè)必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。

2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過(guò)敏反應(yīng)，避免吸入煙霧與皮膚接觸。

3、底物液對(duì)皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護(hù)手套，實(shí)驗(yàn)完成后徹底洗手。

技術(shù)提示

1、混合蛋白溶液時(shí)，避免起泡。

2、加校準(zhǔn)品與樣本時(shí)，每個(gè)校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣，避免交叉污染。

3、合適的溫育時(shí)間，和充分的洗滌步驟，是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。

4、底物溶液為無(wú)色液體，保存過(guò)程中變?yōu)樗{(lán)色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍(lán)色底物產(chǎn)物，會(huì)瞬間變?yōu)辄S色。

6、實(shí)驗(yàn)中，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)標(biāo)明的時(shí)間、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作。

廢物處理

  所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有責(zé)任根據(jù)其實(shí)驗(yàn)的類型和危險(xiǎn)性級(jí)別，進(jìn)行廢物和污物的處理，同時(shí)要嚴(yán)格依照有關(guān)規(guī)定對(duì)待所有的廢物和污物。

【基本信息】

  企業(yè)名稱：黃石市艾恩斯生物科技有限公司

  生產(chǎn)地址：湖北省黃石市黃石港區(qū)磁湖路41號(hào)

  固定電話：0714-6338558

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